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蛋白質(zhì)定性分析

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蛋白質(zhì)定性分析

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項(xiàng)目介紹

一、 蛋白質(zhì)大規(guī)模鑒定(LC-MS/MS SHOTGUN)分析:

     1999年,Yates研究組提出“鳥槍法”(shotgun),其基本技術(shù)路線是針對液體或SDS-PAGE條帶的復(fù)雜混合物用酶(Trypsin)酶解成肽段混合物,然后對肽混合物進(jìn)行多維毛細(xì)管液相色譜分離和串聯(lián)質(zhì)譜分析以及數(shù)據(jù)庫檢索,從而確定蛋白質(zhì)的種類,可同時(shí)鑒定成百上千種蛋白質(zhì)。他們把這種思路稱為多維蛋白質(zhì)鑒定技術(shù),即Mud PIT(multidi-mensional protein identification technology)。與傳統(tǒng)的雙向電泳技術(shù)相比具有靈敏度更高,動(dòng)態(tài)檢測范圍更廣等特點(diǎn)。研究對象是完整的組織、體液或其提取物,其目的在于鑒定出盡可能多的肽和蛋白質(zhì)分子。將溶液內(nèi)蛋白質(zhì)分子或SDS-PAGE條帶的復(fù)雜混合物酶解成肽段混合物,通過液相色譜分離,如2D-LC(陽離子柱SCX和C18反相柱串聯(lián))或1D-LC的C18反相柱,串聯(lián)質(zhì)譜測試,最后用相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索匹配,可同時(shí)鑒定成百上千種蛋白質(zhì)。

二、蛋白質(zhì)膠點(diǎn)鑒定

     利用MALDI-TOF/TOF蛋白鑒定技術(shù)對考/銀染的2D或DIGE點(diǎn)樣本或者較純的蛋白樣本進(jìn)行蛋白鑒定。適合較純或比較單一的蛋白質(zhì)樣品,如雙向凝聚電泳差異點(diǎn)鑒定?;玖鞒淌请p電泳后選出差異蛋白點(diǎn),進(jìn)行膠內(nèi)酶切,然后使用MALDI-TOFTOF質(zhì)譜技術(shù)進(jìn)行蛋白質(zhì)鑒定。該技術(shù)具有速度快通量高的特點(diǎn)。


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蛋白質(zhì)定性分析

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