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當(dāng)前位置:生物測試 ?  細(xì)胞實驗 ? 

細(xì)胞毒性/增殖

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細(xì)胞毒性/增殖

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項目介紹

細(xì)胞增殖及毒性檢測是生物相容性測試的一種,檢測藥物或者新型材料在生物環(huán)境中的毒性情況,即通過檢測材料或者藥物對細(xì)胞的增殖或者生長的影響,來評價藥物或材料的毒性或者活性,主要用于藥物活性篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、抗腫瘤藥效測定等;常用MTT法或者CCK-8法檢測。

操作流程:

(1)收集對數(shù)期細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3x104  ~5x104 個/mL;

(2)96孔加入細(xì)胞懸液,100ul/孔,邊緣用pbs填充,5%CO2 、37℃孵育;

(3)培養(yǎng)24h后給藥,設(shè)置3~6個復(fù)孔,5%CO2 、37℃孵育;

(4)孵育適當(dāng)時間后,棄舊液,用無血清培養(yǎng)基與CCK8按照10:1稀釋200ul/孔/無血清培養(yǎng)基與MTT按照9:1稀釋,200ul/孔,繼續(xù)培養(yǎng)至所需時間點;

(5)CCK8: 時間到后,酶標(biāo)儀450nm/處測量各孔的吸光值。

客戶提供:

(1)足量樣品、樣品信息(如細(xì)胞類型、分子量、溶解性、穩(wěn)定性、保存條件等);
(2)相關(guān)實驗設(shè)計內(nèi)容(如樣品作用時間、濃度等、細(xì)胞株等)。

樣品要求

1.待測樣品(濃度用戶指定)、實驗方案、相關(guān)細(xì)胞、試劑盒及生物耗材等,平臺可有償提供。

項目案例

常見問題
1、MTT法檢測細(xì)胞活性原理

在活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能將外源性MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色甲臢化合物,用二甲基亞砜(DMSO)將其溶解成溶液,用酶標(biāo)儀測定其濃度(OD490或者570),從而定量測定細(xì)胞的存活比例,細(xì)胞增殖越多越快,對應(yīng)的吸光度越高;細(xì)胞毒性越大,對應(yīng)的吸光度越低。

2、CCK8法檢測細(xì)胞活性原理

CCK-8細(xì)胞活性檢測試劑中含有WST-8 —— 一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以為線粒體內(nèi)的脫氫酶驗明正身。在脫氫酶作用下,WST-8被還原生成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物,用酶聯(lián)免疫檢測儀在OD 450nm波長處測定其光吸收值。細(xì)胞增殖越多越快,則顏色越深;細(xì)胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞,顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

3、相較于MTT法,CCK8試劑盒的優(yōu)點有哪些?

1.使用方便,省去了洗滌細(xì)胞,不需要放射性同位素和有機溶劑;

2.CCK-8法能快速檢測;

3.CCK-8法的檢測靈敏度很高,甚至可以測定較低細(xì)胞密度;

4.CCK-8法的重復(fù)性優(yōu)于MTT 法;

5. CCK8適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞;如樣品容易沉淀或殘留且易溶于DMSO,建議選用CCK8法檢測。

細(xì)胞毒性/增殖

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